如何通过染色体检查确诊超雄?

超雄综合征是由有害化学物质、x射线照射、环境因素影响、高龄妊娠、近亲结婚等,妊娠时染色体数量、形态、结构和结合变异引起的疾病。羊水细胞染色体检查对超雄综合征产前诊断具有很大的特异性意义。

超雄综合征是由有害化学物质、x射线照射、环境因素影响、高龄妊娠、近亲结婚等,妊娠时染色体数量、形态、结构和结合变异引起的疾病。羊水细胞培养染色体检测原理,羊水细胞是胎儿皮肤、消化道、呼吸道和生殖泌尿系统脱落的细胞,95%左右是死细胞,因此必须经过细胞培养,充分增殖活细胞,收获细胞,进行核型分析。

操作方法如下:

1、妊娠期16~20周羊水15~30ml,1000r/ml离心10min。

2、抛弃多馀的清液,留下1ml羊水和沉淀细胞,轻轻分散成细胞悬液。

3、养基3ml和小牛血清1ml,放入37℃的温箱培养。

4、培养7~10天后,可以看到大量纤维样品和上皮样品细胞聚集在一起。5、细胞集中扩大成片,有很多透明的圆形分裂细胞时,可以加入秋水仙素,最终浓度为0。1~0。3μg/ml,放置37℃的温箱培育5~6h(上述过程均在无菌条件下进行)。6、细胞生长不旺盛时,生长周期不均匀或细胞老化,未达到收获标准时,可在原瓶继续传承培养。7.将培养液移动到刻度离心管中,将ED-TA-胰蛋白酶液加入1ml到培养瓶中,放入37℃的温箱中5min,用弯头吸管冲洗壁细胞(也可以使用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。8、抛弃上清液,加入预温37℃的0。075mol/LKCl低渗透液3~5ml,放置37℃10~15min。

9.预固定、固定和制片与外周血细胞染色体标本的制作方法相同。

正常情况下染色体总数为46条,其中常染色体22对(编号为1~22)性染色体男性为XY,女性为XX男性核型46,XY女性核型46,XX。羊水细胞染色体检查对超雄综合征产前诊断具有很大的特异性意义。

此时可更换新鲜培养液。

收获标准:①以纤维细胞为主要类型,细胞成长②用10倍的眼镜和20倍的眼镜观察,成长的细胞克隆复盖了1个或1个以上的完整视野③看到10个以上明亮的圆形细胞和10个以上的双圆形明亮的分裂细胞。

方法:无菌条件下先倒入培养液,加入2。5g/L无菌胰蛋白酶液滴数,摇晃后倒下。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中,与原培养液混合,用少量温热的生理盐水冲洗培养瓶,洗净的细胞也一起倒入离心管中,1000r/min离心10min。

染色体检查适用于唐氏综合征(21三体综合征)、18三体综合征、13三体综合征、8三体综合征、22三体综合征、先天性睾丸发育不全综合征、XXY综合征、特纳综合征、X三体、多x体综合征等各种染色体数量异常。

加入胰蛋白酶5~10滴,在37℃轻轻摇动约5min,使贴壁细胞脱落。加入含有小牛血清的新鲜培养基4ml,在37℃静置培养4~5h。小心更换培养液,继续培养,一般传世后3~5天就可以收获。

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