01
遇见/摘要
异戊二烯焦磷酸甲基转移酶丰富萜类化合物结构多样性。本文作者使用多种策略表征香叶基焦磷酸 (GPP) C-6-甲基转移酶BezA。生化分析显示BezA需要Mg2作为辅因子并且仅甲基化GPP。随后作者解析相关晶体结构，并使用点突变、分子对接、分子动力学模拟和QM/MM分析揭示了甲基化反应的分子基础，E170作为催化碱完成甲基化反应。最后作者构建W210A突变体发现其底物偏好为法呢基焦磷酸FPP而非GPP。图片
02
遇见/内容
本文作者在前期研究Benzastatin生物合成途径时发现GPP C-6-甲基转移酶BezA。
JACS. 2018, 140, 6631−6639
GPPC2MT催化GPP在C-2 处发生甲基化反应生成2MGPP，2MGPP随后在萜环化酶作用下产生2-甲基异龙脑（图1c）。但催化GPP在C-6处发生甲基化的酶还未有相关机理报道。
BezA酶学性质表征 BezA的天然底物为GPP，作者首先使用GPP、DMAPP、FPP、GGPP四种底物与BezA反应，结果发现BezA只与GPP反应生成甲基化产物6MGPP和相应甲基化反应副产物SAH，表明BezA底物特异性只为GPP。此外与SlGPPC2MT类似，Mg2+对BezA发挥功能至关重要。
BezA结构解析 接下来作者解析BezA相关晶体结构（图2）。
GPP结合位点预测 为进一步研究甲基化反应的区域选择性与反应机理，作者通过分子对接构建了BezA与SAM、GPP和Mg2+的复合物模型并通过分子动力学模拟优化模型（图3a，3b）。
BezA定点突变实验证实关键催化残基 作者推测BezA催化GPP甲基化反应机理与GPPC2MT机理类似，需要稳定由甲基转移反应形成的C-7碳正离子中间体并且需要从甲基化碳原子中提取质子以生成双键（图1c）。接下来作者分别构建BezA突变体E170Q和F214A发现这两个残基在甲基转移和/或双键形成反应中发挥重要作用，此外Y174和Y28对底物结合口袋形成至关重要（图3c，d）。
BezA和ScGPPC2MT催化C-甲基化反应机理的QM/MM分析 作者通过采用ONIOM方法进行QM/MM分析，结果表明催化残基E170从甲基化碳原子中提取质子（图4）。
BezA底物工程改造 最后作者尝试扩展BezA的底物特异性，BezA和GPPC2MTs的结构比对表明BezA中W210缩小底物结合口袋并抑制FPP和GGPP进入，作者构建BezA_W210A并用于GPP、FPP和GGPP的甲基化测定，但该变体仅催化FPP甲基化反应。
总之，本文作者通过生化分析、结构解析、MD模拟和QM/MM分析鉴定甲基转移酶BezA，其可以催化GPP的C-6处发生甲基化反应。相关催化机理如图1b所示，E170作为催化碱提取C-6处质子完成甲基化反应。并且作者通过理性设计构造突变体BezA_W210A将底物偏好从GPP转变为FPP。本文研究扩展了对C-甲基转移酶反应机制的认识，并丰富非天然萜类化合物生物合成的酶工具箱。
亚组分析。研究终点包括复发性急性缺血性卒中、颅内出血等发生后30天内任何原因的死亡率。
2455例（95.5%）为AIS，95例（4.5%）为TIA。在发病前，773名（37%）患者接受抗血小板治疗，497名（19%）患者接受口服抗凝剂治疗，有76名患者在口服抗凝治疗下出现卒中，并且抗凝治疗没有中断。入院时NIHSS评分缺失160例（6.3%），肾功能缺失276例（10.8%），静脉溶栓信息缺失22例（0.9%）。37名患者出现复发AIS（1.5%），其中57%发生在DOAC治疗后（21/37）。6名患者患有脑出血（0.2%），15名患者在前30天内死亡（0.6%）。任何卒中的30天综合发生率为1.7%（43/2550）。
总之，研究结果并不能证实早期使用DOAC抗凝能够增加ICH风险，复发性AIS的风险是ICH的七倍，其中近一半发生在接受DOAC治疗之前。这表明在心房颤动患者发生AIS后接受早期DOAC治疗是合理的。
原文：De Marchis GM, Seiffge DJ, Schaedelin S, et al Early versus late start of direct oral anticoagulants after acute ischaemic stroke linked to atrial fibrillation: an observational study and individual patient data pooled analysis Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry Published Online First: 11 October 2021. doi: 10.1136/jnnp-2021-327236