在交配季节，野生性成熟的雌蛇捕食量减少，常钻到草丛中，蛇头离地高昂并不断摇晃作起舞状，而人工用箱养殖的雌蛇常会拍打箱板，为寻找导性的现象，此时雌蛇尾部泄殖肛腔处分泌出一种褐色的黏性物，为性激素，具有特殊的气味，对雄蛇具有很大的诱惑力。通常直径约500米内的雄蛇会闻气而来，然后开始追逐雌蛇，不时地伸出舌头嗅雌蛇的身体及尾部，在雌蛇不逃跑反对时雄蛇伏于雌蛇背部，并用尾巴靠缠过去。不过有的雌蛇伏地不动，有的则突然逃离，雄蛇紧追不舍，两蛇经过几次绞缠之后，雌蛇会将尾部腹面略向雄蛇倾侧，雄蛇就会伸出交接器，用两条交接器中的一条，由体内翻出插入雌蛇的泄殖肛腔(图7一1)。两条蛇头有时紧靠着，有时分开，但尾部总是连在一起，若受干扰，两蛇也是同步移动，雄蛇在射精时其身体会抖动，特别是尾部抖动强烈。射精图7 1五步蛇交配后雄蛇尾部下垂，使交接处分开，然后静伏不动，一段时间后雌雄蛇便分开，通常雄蛇先爬走，雌蛇恢复活动较晚。一般两蛇交配持续时间短则为4～7小时，长则半天至1天左右。
交配后的雌蛇第二年才产出受精卵。精子在雌蛇体内的存活期很长，一般达3～6年。因雄蛇有两条交接器，而每次交配时只使用其中的一条，常被人误认为雄蛇的两条交接器是蛇的“脚”。