(1)雌、雄蛇的鉴别与选种乌梢蛇雌雄体相近，雄乌梢蛇的头部较大，腹鳞较小，尾下磷多，尤其是尾基部较雌蛇长，有一对“半阴茎”而稍微膨大。最准确的鉴别方法是将乌梢蛇后半部分的腹面向上，找出其肛孔后，用大拇指按压肛孔后面几厘米处，从后往前挤压，肛孔有一对“半阴茎”伸出。雌蛇的头部较雄蛇略小，腹鳞较多，尾下鳞较少，尾较雄蛇短，且尾部自肛孔以后突然变细，肛孔平凹，用上述同样方法用大拇指按压肛孔后面几厘米处，从后向前挤压没有一对“半阴茎”伸出。
选择蛇龄3岁以上，体重大于40(]克的体质强壮、无伤病、生长发育良好、活泼好动、爬行灵活、蜷缩能力强、动作迅猛有力、毒蛇具有完整的毒牙、繁殖能力强的优良种用蛇。配种的雌、雄蛇比例可按5～8：1。
(2)交配与产卵应将非繁殖期性成熟的成年雌、雄蛇分开饲养，每年的5～7月份是乌梢蛇的繁殖期。种蛇选配时要尽量依据系谱资料，避免近亲交配，有利于提高繁殖仔蛇的成活率。蛇发情时，按比例将种用雄蛇放人种用雌蛇群中，让其自由交配。交配后应做记录建立繁殖档案，并再把雌、雄蛇分开饲养，防止雄蛇干扰孕蛇休息。雌、雄蛇交配后一般性情较为温驯。为了检查雌蛇是否怀卵，用一只手轻轻捏住其颈部，另一只手从雌蛇的腹部开始抚摸至肛孔，如已怀孕其腹部有凸凹感，如果凸凹处距肛孔越近，表明此蛇离卵产出日期越近。如发现凸凹处距肛孔仅有2～3厘米时，表明此蛇即将临产(一般1天内会产卵)，应将临产的蛇关进蛇箱或产卵房中产卵。每次产卵5～17枚。雌蛇产卵没有固定位置，一旦发现蛇卵应及时收集孵化，防止蛇卵受到长时间的阳光暴晒和风吹雨打，使蛇卵受温度和湿度不均等因素的影响而降低蛇卵的孵化率。
(3)人工孵化选择饱满、色泽一致、外形端正的种蛇受精卵放人人工孵卵容器内人工控制温度孵化。孵化器大多采用大口缸罐、桶或箱作容器。器底部垫上一层约30厘米厚的干净沙土(沙土比例为3：1)，湿度以手能握成团、松开即散为宜，并将其压实，然后把蛇的受精卵横卧(不可直竖)排放在容器内的沙土上，在卵上加10厘米左右的沙土，高寒地区可在孵化器内盖上棉花保温，然后将孵化器放置室内并加盖，防止老鼠、蚂蚁和蚊虫等对蛇卵的侵害。并注意保持28～30℃以上的有效孵化温度相对稳定，若低于20℃，会使孵化期延长甚至蛇卵难以孵出仔蛇；若温度偏高，虽提前孵出仔蛇，但畸形仔蛇和死亡率增加。并应经常喷水，使沙土保持绝对湿度在15％左右，每隔7～10天翻卵1次，照卵检查其胚胎发育情况，发现未受精卵或死胚卵应及时捡出。