(一)病理检查可见阴囊皮损处表皮显著角化，颗粒层减少或消失，重症病例除表皮角化过度外，基层细胞有色素减少或消失。真皮内毛细血管有不同程度扩张。唇 、舌等上皮也见角化，舌乳头萎缩者组织象亦显著萎缩。
(二)尿核黄素测定 以每克肌酐表示。为了诊断的可靠性,最好收集24小时尿测定。结果<27μg/每克肌酐,提示成人维生素B2缺乏，小儿值高于成人。
(三)尿排泄负荷试验 口服负荷剂量的核黄素5mg,收集4小时尿测定排泄量。成人排泄量<1000μg为核黄素缺乏。
(四)红细胞谷光甘酞还原酶(EGR)功能试验临床上选择该试验作为评价维生素B2营养状况的最新的简便易行的方法。该试验以"FAD效应"为衡量指标 。加入FAD后,酶活性上升超过20%者,提示组织中核黄素储存量不足。